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本试剂盒适用于从各种抗凝或非抗凝全血样本中提取总蛋白。本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解细胞膜组份，包括细胞质膜、核膜和各种细胞器膜。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。

本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究。

本试剂盒提取的蛋白样本含有高浓度的盐成分，不可直接用于2D电泳。如下游实验需要直接用于等电聚焦、双向电泳，请使用我公司其他货号的试剂盒。也可以将最后样品除盐后再用于2D电泳，用脱盐柱脱盐处理。需要提取血清、血浆、血细胞蛋白，可以联系我们的客服选择其他货号的产品。

• 使用方便，将蛋白提取的时间缩短至30分钟。
  
• 含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
  
• 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
  
• 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

• 蛋白酶抑制剂未开盖前也可以2～8℃保存，开盖使用后-20℃保存。
  
• 蛋白酶抑制剂在2～8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

• 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
  
• 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
  
• 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
  
• 蛋白酶抑制剂混合物避免反复冻融。
  
• 如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
  
• 本试剂盒提取的是全血总蛋白，含所有高丰度的白蛋白等。电泳前可以蛋白稀释液稀释至约5μg/μL。
  
• 电泳加Loading Buffer后水煮时，蛋白液有时会变得非常粘稠，可以用65℃保温10分钟代替沸水煮。
  
• 对于某些目的蛋白在血清中含量很低的情况，或者目的蛋白与白蛋白分子量相近的情况，可能需要先去除白蛋白，需要根据情况选择。白蛋白等去除试剂盒需要自备。

• 提取液制备：
  每500μL蛋白提取液中加入2μL蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
  注：
  ● 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
  ● 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。
  ● 蛋白样品用于测定某些细胞内蛋白酶、磷酸酶活性等下游实验时，注意根据实际情况调整抑制剂混合物是否加入。
  ● 以下步骤中使用的蛋白提取液为此步配制好的含蛋白酶抑制剂的提取液。
  
• 取300μL全血样品，加入300μL蛋白提取液，充分混匀后，在4℃条件下振荡20～40分钟。
  注：
  ● 使用振荡器/摇床的较低转速，提取液能轻微晃动即可。
  ● 没有振荡条件也可以不振荡，稍微延长提取液的处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀即可。
  
• 在4℃，14000×g条件下离心10分钟。
  
• 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到全血总蛋白。
  注：
  ● 一般沉淀只是离心管底部薄薄一层，没有明显团块。
  ● 整个红色液体即是全血蛋白上清液。
  
• 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
  注：
  ● 建议用BCA法进行蛋白定量。
  ● 蛋白样品-80℃存放一年没问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。
  ● 全血样品蛋白浓度较高，需要稀释后用于下游实验。一定要根据蛋白定量的情况稀释至合适的浓度再用于电泳等下游实验应用。

• 用什么方法定量蛋白？
  建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。
  
• 提取的蛋白具有活性吗？
  本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。
  
• 电泳蛋白煮样品后成胶状？
  全血蛋白样品浓度极高，需要稀释到合适的浓度再进行下游检测。